结合表1至表8及图1所示

作者:admin 来源:未知 点击数: 发布时间:2019年11月05日

  结合表1至表8及图1所示,通过极差分析、方差分析等方法可知,对红果金丝桃不同的生长指标来说,最优组合并不是唯一的。用四种不同的培养基和三种不同浓度的激素的组合对红果金丝桃植株进行培养,接种后再对植株的芽生长量、叶片增长量和愈伤组织增长量进行观测,得到数据后进行分析,WPM+6-BA 2.0+NAA 0.1+2,4-D 0.1最适合芽的生长;上述培养基最有利于愈伤组织产生, WPM是最适培养基;MS、1/2MS培养基内培养的植株更易产生叶片的愈伤组织。

  (3)接种培养:将消毒好的材料接种到初代培养基上,置于培养室内培养,然后进行初始值的调查记录,一周后观察生长状况,该培养室的温度为 19.5~20.5℃,光周期为24h(光照),日光灯光源,光照强度为1400-2000Lx。

  (1)培养基的配制:选定基础培养基,添加蔗糖和琼脂,再加入0.5~2.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.5~0.15mg/L萘乙酸及0.1~0.4mg/L 2,4-D后,调节pH为5.8-6.0,进行灭菌;

  计算得出FFa,则拒绝原假设,A、B、C、D四个因素对试验结果都有显著影响,最优水平组合为A4B4C1D1。

  极差分析法第一步先计算Ki值,Ki为同一水平之和,以第一列A因素为例:K1=62,K2=46,K3=61,K4=56,依次可算出其他因素的Ki值。

  有益效果:与现有技术相比,本发明的显著优点为:该红果金丝桃的初代培养方法不仅能够有效保存新品种,不会使红果金丝桃黄色消退,且繁殖周期短,繁殖效率高,能够大规模繁殖红果金丝桃,以供给市场;此外,通过四因素四水平正交试验,不仅可以缩短工作量,而且可以筛选大量的培养基和激素浓度,从而科学的筛选出最适宜的培养基。

  再进一步说,本发明采用的蔗糖和琼脂的浓度优选可为30~35g/L和6~7g/L。 6-苄氨基腺嘌呤的浓度为2.0mg/L。萘乙酸的浓度为0.1mg/L。2,4-D的浓度为 0.1mg/L。

  发明目的:本发明的目的是提供一种能够有效保存新品种,且不会使红果金丝桃黄色消退的初代培养方法。

  极差分析法又叫直观分析法,它具有计算简单、直观形象、简单易懂等优点,是正交试验结果分析常用的方法。因此,通过极差分析法来计算得出不同激素和培养基的组合对红果金丝桃叶片数量增长的影响是最佳的方法,获得的结果如表4所示。

  因为F检验的结果为各处理间的差异显著,所以进行多重比较,进一步判断两两处理平均数之间的差异显著性。通过stst软件进行新复极差比较得出多重分析结论,获得的结果如表7所示。

  红果金丝桃(Hypericum ino‘Excellent Flair),又称金丝海棠,为藤黄科 (Guttiferae)金丝桃属(Hypericum monogynum L.)常绿小灌木。景观用途可丛植、密植排水良好处作花带或花篱,生长习性耐寒,喜光,稍耐阴,可植于疏林下形成复层景观结构。宜湿润的砂质壤土,忌积水。根系发达,萌芽力强,耐修剪。该木与普通金丝桃另一不同之处在于枝干呈直立状,果红,观赏价值高。此外,红果金丝桃在作为切花在插花中也有运用,尤其是红果金丝桃与一枝黄花的搭配组合运用广泛。红果金丝桃的繁殖培育一般以播种或扦插为主,但繁殖周期较长,且传统繁殖方法效率低下,无法满足日益增长的市场的需要。

  第五步做因素与指标趋势图,直观分析出指标与各因素水平波动的关系,如图1所示。

  (2)外植体处理:本实施例采用的红果金丝桃取自江苏句容市某基地,生长状况良好,剪取幼嫩植株带叶茎段用于进行初代培养。用剪刀对采集枝条上的较大叶片进行修剪,将枝条剪成2-3cm不等的带叶茎段放置于透明烧杯中,加入洗衣粉,烧杯口用纱布盖住并用皮筋固定,用自来水冲洗一夜。在无菌条件下,将冲洗干净的茎段在75%的酒精中浸泡40s,用无菌水冲洗两次后再用升汞消毒 5min,最后用无菌水冲洗三次,处理完后,将茎段放在干净烧杯中,以备接种,此消毒方法可保证接种时污染率降低。

  第六步选出优组合,根据极差分析表和因素指标趋势图可知A1B4C1D2是最优组合。

  因此通过多重比较结果看出处理间差异显著,再比较平均数大小,平均数最大的最显著,即处理8为最优处理。

  更进一步说,本发明的培养室的温度为19.5~20.5℃,光周期为24h,光照强度为1400-2000Lx。

  进一步说,本发明的基础培养基可为MS、1/2MS、B5或者WPM培养基。优选的,可为MS、1/2MS或者WPM培养基。进一步优选可为WPM培养基。

  图1为不同激素和培养基的组合对红果金丝桃叶片数量增长的影响的因素与指标趋势图。

  多重比较结果的字母表达:以小写英文字母表示ɑ=0.05水平下的比较结果;以大写英文字母表示ɑ=0.01水平下的比较结果。以相同字母表示差异不显著的比较结果,不同字母表示差异显著。

  本发明添加了2,4-D,其与其它生长调节剂相结合,能够有效促进了愈伤组织的形成,为下一步继代培养提供了新的来源,使组培的繁殖系数进一步扩大。

  第二步计算各因素同一水平的平均值。k1=15.5,k2=11.5,k3=15.25,k4=14。

  极差分析法简单明了,通俗易懂,计算工作量少,但这种方法不能区分因素各水平间对应的试验结果差异究竟是由因素水平不同引起的,还是由于试验误差引起的,无法估计试验误差的大小,采用方差分析弥补极差分析的缺陷。为了进一步研究红果金丝桃的生长状况,采用方差分析对其芽的增长量进行计算和分析,

  注:未褐变(-),褐变不明显(+),轻度褐变(++),褐变(+++),严重褐变(++++)。愈伤组织生长评价方法:极好(++++)、好(+++)、较好(++)、一般(+)、抑制(-)。

  第四步根据极差大小,判断因素的主次影响顺序。R越大,表示该因素的水平变化对试验指标的影响越大,因素越重要。

  (1)培养基的配制:本实施例通过正交设计采用四种不同的培养基,分别为MS、1/2MS、WPM和B5,附加不同浓度的6-BA、NAA和2,4-D,具体如表1、表2及表3所示。培养基中添加蔗糖30g/L、琼脂7g/L,PH值5.8-6.0,所有培养基都经湿热灭菌1h左右;

  红果金丝桃生长速度快,在生长量不断增长的同时,根部也极易产生愈伤组织。通过对接种之后红果金丝桃植株的观察和分析,获得的结果如表8所示。在调查中还发现在MS、1/2MS培养基内培养的植株更易产生叶片的愈伤组织。

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